1.皮肤刺激/腐蚀性

框架文件：OECD GD 203

核心方法：TG 439 重建人体表皮试验（RHE）

该方法利用组织工程学，以人源非永生化的角质形成细胞为基础，在气液界面上诱导分化，构建与原生表皮高度相似的三维模型（含基底层、棘层、颗粒层和功能性角质层）。受试物涂在模型表面，敷浴后用MTT比色法测定线粒体脱氢酶活性，量化组织细胞活力，以此判断是否具有皮肤刺激性。该方法的最大优势是直接预测人体反应，无需再做种属外推。适用于TG 439的模型需经过3家权威实验室验证，对20个参考化学品做3次以上有效测试，灵敏度≥80%、特异性≥70%、准确度≥75%。

分类对接GHS：皮肤腐蚀分为1A/1B/1C（严重度递减），皮肤刺激分为Cat.2，轻度刺激为Cat.3。

方法体系汇总：

2.眼刺激/腐蚀性

框架文件：OECD GD 263（2023年版）

眼刺激性评价的GHS分类为三档：Cat.1为严重损伤（腐蚀），Cat.2为眼刺激（2A为7天内可逆，2B为7天内不可逆），其余为未分类。

主要体外方法：

2025年重要更新：OECD于2025年6月发布了56项新/更新测试指南，其中包括TG 467眼刺激领域的定义方法指南修订，扩展了适用范围以包含表面活性剂。TG 467将方法组合标准化，按受试物类型选择不同策略：非表面活性剂液体使用DAL-1或DAL-2，固体使用DAS，表面活性剂使用专用DSF方案。每种组合都有固定的数据解释规程，直接输出GHS分类结论。

方法体系汇总：

3.皮肤致敏性

框架文件：OECD GD 256

皮肤致敏是局部毒性中机制研究最深入的领域，AOP链条非常清晰，也是定义方法最成熟的终点。

AOP四个关键事件（KE） ：

我国的“三选二”策略：从KE1到KE3中选两个关键事件的实验结果，一致即可判定；不一致则需补充第三个关键事件的实验，取两次一致的结果判定。

目前《化妆品安全技术规范》已收录的皮肤致敏替代方法包括：DPRA、ADRA、h-CLAT、U-SENS和LuSens方法。

效力分级：识别出致敏物后，还需进行GHS效力分级——GHS 1A为强致敏物（EC3≤10μg/cm²），GHS 1B为中弱致敏物（EC3在10~1000之间）。

方法体系汇总：

4.皮肤光毒性

光毒性AOP四步：

分子起始事件：物质吸收290-700nm紫外可见光

分子被激发：通过Ⅰ型或Ⅱ型光化学反应产生活性氧（ROSS）

关键事件：ROS攻击脂质/蛋白/DNA引发细胞损伤

不良结局：皮肤光毒性（光刺激皮炎）

评价流程（三层决策） ：

第一层初筛：OECD TG 101（紫外可见光谱）或TG 495（ROS检测），二者有一者为阴性无需后续实验

第二层细胞验证：TG 432（3T3中性红摄取）或TG 498（重建人表皮光毒性），二者有一者为阴性无需后续实验

第三层暴露校正（可选）：TG 427/TG 428皮肤吸收试验

TG 498的优势在于具有角质层屏障，可耐受UVB照射，更加贴近人体的实际使用场景，也适用于配方及难溶物的检测。

方法体系汇总：

5.皮肤吸收（经皮吸收）

框架文件：OECD TG 428

皮肤吸收评价的目的是预测化学原料在离体皮肤中的经皮吸收率。吸收率直接决定安全边际值（MoS值）的大小。

《化妆品安全评估技术导则》（2021年版）取值规则：

无透皮吸收数据：吸收率按100% 计（最保守默认值）

满足部分条件（分子量＞500Da、log P≤-1或≥4、TPSA＞120Ų、熔点＞200℃）：吸收率可按10% 计

结构稳定聚合物（平均分子量＞1000Da，低聚物含量＜1%）：可不考虑透皮吸收

注意：吸收率不按100%计时，需要提供有关情况的说明。

体外实验流程：准备皮肤（首选巴马小型猪，厚度0.5-1.0mm）→安装扩散池→涂抹样品→达到暴露时间后清洗→分别收集角质层/表皮/真皮/接收液计算吸收率。

方法体系汇总：